系统性硬化症(SSc)是一种自身免疫性结缔组织疾病，其特征是微血管和免疫反应改变，随后是进行性纤维化，这是由活化的肌成纤维细胞介导的受损组织水平上细胞外基质分子(主要是纤维连接蛋白和I型胶原(COL1))过量产生和沉积的结果。肌成纤维细胞表达a-平滑肌肌动蛋白(aSMA)，这是其表型的特征，可能起源于不同的细胞类型，包括成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞以及纤维细胞。循环纤维细胞是骨髓祖细胞，表达造血(CD34、CD45和MHC II类)和基质细胞(COL1和COL3)以及趋化因子受体(CCR2、CCR7)的特异性标志物。此外，纤维细胞表达CXCR4，调节其向损伤组织的迁移和向成纤维细胞/肌成纤维细胞的分化。

图1所示。实时定量聚合酶链反应分析αSMA、COL1、tgf - β1和CXCR4基因在未处理(CNT)或不同浓度CTLA4-Ig(10、50、100和500μg/ml)作用3小时的SSc纤维细胞和HS纤维细胞中的表达。采用Mann-Whitney非参数检验进行统计分析。
* = p < 0.05， ** = p < 0.01。

在体外，纤维细胞从循环CD14分化⁺单核细胞转变成纺锤形成纤维细胞样细胞，通过表达HLA-DR和共刺激分子CD86表现出抗原呈递能力，从而激活炎症和纤维化性自身免疫性疾病的免疫反应。

CTLA4-Ig融合蛋白(abatacept)与抗原呈递细胞(APCs)(如巨噬细胞和内皮细胞)表面的CD86相互作用，对比了几种自身免疫性疾病(包括SSc)的促炎和血管生成过程。

由于人纤维细胞似乎是apc，也是生理和病理组织重塑中成纤维细胞/肌成纤维细胞的重要来源，本研究的目的是研究阿巴接受对培养的人纤维细胞和来自同一SSc患者的皮肤成纤维细胞的可能影响，作为治疗SSc纤维化过程的新方法。

从SSc患者和健康人(HSs)的外周血单个核细胞中分离出纤维细胞，在含有20%胎牛血清的DMEM中纤维连接蛋白的平板上进行基线培养;过夜培养后，仅贴壁纤维细胞再培养8天(T8)，使其完全分化。分化后的纤维细胞维持在生长培养基中，或用不同浓度(10、50、100、500 μg/ml)的CTLA4-Ig处理。纤维细胞以CD45为特征⁺趋化因子受体CXCR4⁺COL1⁺在基线和T8时用流式细胞术评估细胞表面CD86和HLA-DR的存在。采用实时定量聚合酶链反应检测aSMA、COL1、CXCR4、TGFb1和CD86基因的表达。

在基线时，纤维细胞百分比(CD45⁺趋化因子受体CXCR4⁺COL1⁺细胞)在SSc患者中高于HSs，而CD86⁺两组的纤维细胞数量均显著增加(表2)。T8时，SSc纤维细胞CD68、aSMA、TGFb1和COL1的基因表达高于HS纤维细胞(表1)。我B)。

选项卡。A. SSc和HS纤维细胞分离的纤维细胞的流式细胞术分析，在CD45细胞中鉴定为CD45+COL1+CXCR4+细胞，以及基线时HLA-DR和CD86的相对表达。数据报告为循环免疫细胞群体中纤维细胞(表征为CD45+COL1+CXCR4+细胞)百分比、表达CD86的纤维细胞百分比和表达HLA-DR的纤维细胞百分比(在纤维细胞群体中评估)的平均值±标准差。
选项卡。I .在正常生长培养基中培养8天(T8)的系统性硬化症(SSc)患者和健康人(HSs)分离的纤维细胞中CD86、αSMA、tgf - β1和COL1基因的实时定量聚合酶链反应分析。数据以均数±标准差报告。

值得注意的是，CTLA4-Ig治疗显著下调了t8培养的SSc纤维细胞中αSMA和COL1基因的表达(与未治疗的纤维细胞相比，p<0.01, p<0.05)，而对TGFb1和CXCR4基因的表达没有影响(图1)。

由于其CD86的高表达，循环纤维细胞似乎比从同一SSc患者分离的皮肤成纤维细胞对阿巴接受治疗更敏感。abat接受所描述的效果可能代表了一种早期干预SSc的新方法，因此在祖细胞(纤维细胞)最终归巢和分化为纤维化肌成纤维细胞之前作用于它们。

Maurizio Cutolo, Stefano Soldano
官方manbetx手机版热那亚大学内科临床风湿病研究实验室和学术部门，意大利热那亚圣马蒂诺医院IRCCS综合诊所

出版

CTLA4-Ig治疗对来自同一系统性硬化症患者的循环纤维细胞和皮肤成纤维细胞的影响:体外实验
Cutolo M, Soldano S, Montagna P, Trombetta AC, Contini P, Ruaro B, Sulli A, Scabini S, Stratta E, Paolino S, Pizzorni C, Smith V, Brizzolara R
2018年7月27日

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