黄citri无性系种群。citri（x citri)是一种革兰氏阴性细菌和柑橘溃疡病的病原体，这是一种严重的疾病，影响世界各地所有重要的商业柑橘品种。防治这种由风雨共同作用的植物病菌传播的最佳方法是铲除果园中有症状和无症状的树木。然而，在政治和经济环境的共同作用下，从2017年初开始，巴西圣保罗州取消了根除工作;主要的橙子产区，也是世界上最大的橙汁生产国。目前，控制是通过加强农业综合管理实践来实现的，除其他外，这需要经常喷洒铜制剂，这是一种在土壤和水库中积累的潜在有毒金属。

图1所示。柑橘中ParB-TAP的耗竭ΔparB。在复制载体pLAC2上缺失了染色体分离基因parB并表达parB - tap的柑桔细菌性病原菌X. citri在起始od为~0.1的600nm处进行最佳培养。生长6h后，将启动子诱诱剂阿拉伯糖(0.05%)和抑制物葡萄糖(2%)添加到培养物中(A中黑色垂直箭头)。O.D.600nm每6h测量一次，用于构建(A)所示的生长曲线。B) ParB-TAP的损耗窗口。在A曲线中指定的时间点提取细胞样本，并进行western blot免疫检测ParB-TAP。时间为6h(1-2车道)，在添加任何糖之前，复制载体pLAC2的ParB-TAP基本表达;注意在葡萄糖暴露13h和19h时ParB-TAP的缺失;在这些时间点，细胞已经拉长，培养物可能显示出更多的无核杆状细胞，这提示染色体分离缺陷(C)。B中的第3和第6车道是空的。

我们的团队长期以来一直致力于开发控制柑橘溃疡病的替代方法，这些方法基于使用更有效且毒性更低/环境友好的化合物，这些化合物能够破坏至关重要的细胞过程x citri。完成这项任务的一个重要步骤是对可能被破坏的潜在靶标的蛋白质进行遗传和生化表征的可能性。不幸的是，在这种植物病原体中寻找目标并不容易，特别是当所研究的基因/蛋白质对生命至关重要时。在一些生物体中，规避这个问题的另一种选择是在不去除基因的情况下调节转录或翻译的可能性。在这项工作中，我们报道了pLAL/pLAC系列蛋白表达载体的构建和表征，用于蛋白质耗尽研究x citri。我们的载体携带来自pBAD系列的阿拉伯糖启动子大肠杆菌。的x citri蛋白表达系统使该植物病原体的蛋白表达可控，显示出非常好的转录调控能力，启动子泄漏很少(如果使用复制载体pLAC)，或者根本没有泄漏(当使用pLAL衍生物作为单个拷贝整合到细菌染色体上时)(图1)。为了验证它们，pLAL载体被用作互补工具，用于清洁删除parB在x citri是一种分布广泛且保守的基因，参与细菌染色体分离的基本过程。后parB敲除时，我们使用pLAL-parB异位表达ParBx citri。ParB失衡引起的影响x citri通过调节ParB的表达来研究。这两种情况下，ParB的过量产生或耗竭都会导致染色体分离缺陷，而不影响其分离的能力x citriDparB定植宿主柑橘并引起疾病的突变株。最后，这里描述的阿拉伯糖表达载体是蛋白质表达，基因互补，蛋白质缺失，特别是协助删除必需基因的有价值的工具x citri可能还有相关的植物病原体。

•恩里克•费雷拉
Depto。里约克拉罗生物科学研究所生物微生物学研究中心，
巴西里奥克拉罗，贝拉维斯塔，圣保罗大学，大街24-A 1515

出版

利用阿拉伯糖启动子在柑橘黄单胞菌亚属中的蛋白耗竭。citri。
Lacerda LA, Cavalca LB, Martins PMM, Govone JS, Bacci M Jr, Ferreira H
质粒，2017年3月

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