鸟型分支杆菌亚种副结核(Map)在人类克罗恩病、家养和野生反刍动物慢性肠道疾病中具有病原学意义。这种机会性病原体可以在宿主体内增殖，同时在环境中生长受到限制。Map的生长限制可能是由于环境温度低，缺乏外因菌素，以及背景菌群的影响，这些背景菌群可能大量存在，具有表型和基因型多样性，因此很难从许多其他细菌物种中分离出Map。Map -菌生长缓慢，需要在原代培养基上生长长达18周，并且在非无菌样品中进行初步浓缩和化学净化程序后，没有公认的用于分离该生物的选择性培养基需要使用一系列培养基进行分离。

图1所示。去污对从尖刺水沉积物中回收Map的影响，这代表了在接触持续时间为2,3和4小时时，以0.75% w/v CPC进行去污的3次重复运行的平均值。

然而，培养和去污实践并不总是能恢复存在的Map的原始数量，因为可能存在可存活的不可培养形式和不可存活或死亡的细胞。此外，去污剂的种类和浓度以及去污接触时间的长短都可能导致Map的完全丢失或低收率。从环境样品中检测Map存在两个主要问题，即，该生物可能以低数量存在于高背景微生物群中，这对分析的敏感性和特异性有影响，并且样品中可能存在腐植酸等成分，可能会产生意想不到的后果。为了克服这些问题，研究人员设计了浓缩靶Map细胞和去除非靶细胞和可能的抑制性化合物的方法。所采用的技术包括通过过滤和离心与免疫磁分离(IMS)浓缩Map，然后用0.75% w/v十六烷基氯化吡啶(CPC)去污。文献中报道的净化程序使用浓度为0.75% w/v的CPC，在不同的接触持续时间。这种方法是成功的，并导致从包括牛奶和未经处理的水在内的样品中回收Map。在不同的时间间隔(即2、3和4小时)对去污方法进行评估，而需要进行经验评估，以确定哪些时间间隔可以显著减少或完全杀死所有背景微生物群，并促进从水沉积物中恢复Map。从水体沉积物中回收Map，采用固体和液体培养基，即常规培养基HEYM、M-7H10和Bactec 12B。所有培养基均添加抗生素鸡尾酒[(PANTA; 40 U/ml polymyxin, 4 µg/ml amphotericin B, 16 µg/ml nalidixic acid, 4 µg/ml trimethoprim, and 4 µg/ml azlocillin) and VAN; vancomycin (10 µg/ml), amphotericin B (4 µg/ml) and nalidixic acid (16 µg/ml) for HEYM and M-7H10; PANTA for Bactec 12B)] and mycobactin J (2 µg l¹）.基于初始浓度约为10的Map的回收率百分比⁶细胞毫升¹M-7H10培养基在接触2、3和4 h时，分别为91.1%、87.5%和75.6%，而HEYM培养基为92.7%、88.4%和77.8%。单独考虑两种介质，在三种接触时间下的恢复有显著差异(P < 0.05)，其中2小时的恢复最大，随着与CPC接触时间的增加而下降。在调查的任何接触时间内，两种介质之间的恢复没有显著差异(P < 0.05) -结果如图1所示。

Bactec 12B试验也显示，在三次重复运行获得的平均数据后2小时的生长指数高于3和4小时(图2)。

图2所示。生长指数测量的平均数据为10⁶细胞毫升¹在0.75% (w/v) CPC消毒后，分别于接触时间2,3和4小时孵育18周。

三种接触持续时间的滞后期延长至第10周，此后分别为2、3和4小时的指数期，分别为15、16和17周，稳定至18周。指数期2 h的生长指数高于3 h和4 h，说明增加接触时间不利于Map在孵育期间的存活。此结果显示了与图1中所示类似的恢复模式。因此，使用辐射(Bactec 12B)或非辐射(M-7H10和HEYM)介质，随着去污接触时间的增加，回收率降低。

乔治Aboagye
食品微生物学，英国北爱尔兰贝尔法斯特女王大学

出版

水体沉积物净化方法优化及培养基对禽分枝杆菌副结核亚种回收的影响。
博阿格·G，罗·MT
微生物学杂志，2018年7月

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